Grupo de lingua espanhola e portuguesa de la ISFG
Grupo de lingua espanhola e portuguesa de la ISFG
Estudo de colaboração de STRs do cromossoma X
 
Nas XI Jornadas do GEP-ISFG, em Madrid, foi apresentada uma proposta de realização de um trabalho de colaboração entre laboratórios do grupo com o objectivo de se avaliar um multiplex para estudo de X-STRs. Este trabalho será coordenado pelo grupo de cromossomas sexuais do GEP-ISFG em colaboração com a “Unidad de Medicina Legal del Laboratorio de Genética Forense de la Universidad de Cantabria” e com o “Instituto de Medicina Legal de Santiago de Compostela”.

 

Os laboratórios interessados em participar devem inscrever-se enviando un e-mail a Leonor Gusmão (lgusmao@ipatimup.pt). Para participar neste trabalho, os laboratórios terão que pagar uma inscrição de 50 euros para suportar gastos na compra e envio de primers e amostras. Para obter informação acerca de como realizar o pagamento, por favor consultem a pagina web do grupo (http://www.gep-isfg.org/ISFG/Portugues/Controle_de_qualidade/formas_pago.php) e, em caso de dúvida, contactem o tesoureiro, Iñaki Yurrebaso (karan@euskalnet.net).
 
Data limite para inscrição no exercício: 15 de Novembro de 2006

Aos laboratórios inscritos, serão enviadas 2 amostras (manchas de sangue em papel FTA) e uma alíquota de primers para a amplificação dos 10 STRs

Aos laboratórios inscritos, serão enviadas 2 amostras (manchas de sangue em papel FTA) e uma alíquota de primers para a amplificação dos 10 STRs incluídos no multiplex.

Os resultados obtidos para as 2 amostras enviadas, mediante a utilização do multiplex (cujos protocolos se anexam no final deste documento), devem ser enviados por e-mail a Leonor Gusmão (lgusmao@ipatimup.pt).

 

Data limite para envio de resultados: 31 de Janeiro de 2006

 
Protocolo de amplificação X-STR DECAPLEX
 
X-STRs: DXS8378, DXS9898, DXS7133, GATA31E08, GATA172D05, DXS7423, DXS6809, DXS7132, DXS9902, DXS6789

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
 
Tabela 1. Primers: sequencia e marcação

 

Locus
Secuencia de los primer (5’-3’)
Ref.
DXS8378
6-FAM TTAGGCAACCCGGTGGTCC ACAAGAACGAAACTCCAACTC
[1]
DXS9898
6-FAM CGAGCACACCTACAAAAGCTG TAGGCTCACCTCACTGAGCA
New
DXS7133
6-FAM CACTTCCAAAAGGGGAAAAA ACTTGTACTTGGTGGGAGGAA
New
GATA31E08
6-FAM GCAAGGGGAGAAGGCTAGAA TCAGCTGACAGAGCACAGAGA
New
GATA172D05
VIC TAGTGGTGATGGTTGCACAG ATAATTGAAAGCCCGGATTC
[1]
DXS7423
VIC GTCTTCCTGTCATCTCCCAAC TAGCTTAGCGCCTGGCACATA
[1]
DXS6809
VIC TCCATCTTTCTCTGAACCTTCC TGCTTTAGGCTGATGTGAGG
New

 

DXS7132
NED TCCCCTCTCATCTATCTGACTG CACTCCTGGTGCCAAACTCT
New
DXS9902
NED CTGGGTGAAGAGAAGCAGGA GGCAATACACATTCATATCAGGA
New
DXS6789
NED CTTCATTATGTGCTGGGGTAAA ACCTCGTGATCATGTAAGTTGG
New

 

[1] Edelmann et al. Forensic Sci Int 129: 99-103 (2002)

 

Reactivos PCR:
- 10X Primer Mix (inclui todos os primers a uma concentração de 2µM. Na Tabela 1 esta indicada a sequencia e marcação dos primers)
- QIAGEN Multiplex PCR kit (http://www.qiagen.com)
 
 
PCR (Qiagen amplification kit)
 

 
Volume per amostra

 

 
2x Qiagen Multiplex PCR Master Mix
5 µl
 
10x Primer mix
1 µl
 
H2O
3,5 µl
 
 
 
 
 
 

9,5 µl

+ 0.5 µl ADN (1 ng/µl)

10 µl volume final

 

Condições cíclicas da PCR

 

Desnaturação inicial

95 ºC

15 min

 

94 ºC

30 sec

10 X

60 ºC

90 sec

 

72 ºC

60 sec

     
 

94 ºC

30 sec

20 X

58 ºC

90 sec

 

72 ºC

60 sec

     

Extenção final

60 ºC

60 min

 

Post PCR
 
Size standard LIZ500; Filtro G5
Size standard ROX500; Filtro D

Amostras de referencia:

Locus
9947A
9948
NA3657
Referencia
DXS8378
10-11
11
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS9898
12-15
13

 

Gomes et al. IJLM (enviado)
DXS7133
9-10
11
9
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
GATA31E08
11
10

 

Shin et al. FSI 147 (2005) 35-41
GATA172D05
10
6
9
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS7423
14-15
14
13
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS6809
31-34
31
29
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS7132
12
13
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS9902
11
12
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS6789
21-22
20
23
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43